Exigences relatives aux tests des kits ELISA
May 25, 2019
Faites un bon contraste dans le test formel, les conditions de test des contrôles positifs et négatifs doivent être prises et les échantillons à tester doivent être réalisés en deux exemplaires pour garantir l'exactitude des résultats du test.
Parfois, le bruit de fond est plus élevé, indiquant une réaction non spécifique, et peut être fermé par du sérum de mouton, du sérum de lapin ou de la BSA.
Sélection des conditions expérimentales
En ELISA, il est important de sélectionner diverses conditions expérimentales, notamment : (1) Choix des supports en phase solide- : De nombreuses substances peuvent être utilisées comme supports en phase solide-, telles que le PVC, le polystyrène, le polyacrylamide et la cellulose. Il peut prendre la forme d'une plaque concave, d'un tube à essai, d'une bille, etc. Actuellement, il est couramment utilisé pour avoir des plaques concaves en polystyrène de 40 puits.
Quel que soit le type de support, avant utilisation, il peut être examiné : avec la même quantité d'antigène, réagir dans les mêmes conditions expérimentales, pour observer si sa réaction de rendu des couleurs est homogène, selon laquelle il s'agit d'une bonne performance d'adsorption. (2) Emballage par sélection d'anticorps (ou d'antigène) : anticorps (ou antigène) adsorbé à la surface du support en phase solide-, la sévérité des exigences est meilleure, l'adsorption nécessite généralement un pH compris entre 9,0 et 9,6. La température, le temps et la quantité de protéines d'adsorption ont également un certain impact, généralement supérieur à 4 degrés C sur 18 à 24 heures. La concentration optimale des packs de protéines doit être titrée : après avoir été conditionnés avec différentes concentrations de protéines (0,1, 1,0 et 10 µg/ml, etc.), les valeurs de DO des échantillons positifs sont observées lorsque les autres conditions de test sont les mêmes. Sélectionnez la concentration avec la valeur OD la plus élevée et la quantité de protéines la plus faible.
Pour la plupart des protéines, elle est généralement de 1 à 10 µg/ml. (3) Sélection de la concentration de travail de l'anticorps marqué à l'enzyme {{4} : tout d'abord, l'effet initial du titrage à l'aide de la méthode ELISA directe (voir la partie anticorps marqué à l'enzyme -).
Ensuite, corrigez d'autres conditions ou utilisez la « méthode du tableau carré » (pack edgy, référence pour l'échantillon à examiner et les anticorps marqués par une enzyme-sont des dilutions différentes) dans le système expérimental formel pour titrer avec précision sa concentration de travail. (4) Le choix de la base de l'enzyme et du donneur d'hydrogène : le choix du donneur d'hydrogène est peu coûteux, sûr, avec une réaction de rendu des couleurs-claire, et lui-même est incolore. Certains donneurs d'hydrogène (par exemple OPD, etc.) ont des effets cancérigènes potentiels, il convient de veiller à les protéger. Les personnes conditionnelles devraient utiliser des donneurs d'hydrogène non -cancérigènes et à haute sensibilité, tels que le TMB et l'ABTS, qui sont actuellement des donneurs d'hydrogène plus satisfaisants. Après une période d'action, des acides ou des alcalis forts doivent être ajoutés pour arrêter la réaction. Habituellement, le temps d'action du substrat, de 10 à 30 minutes, est approprié. Le fluide d'utilisation du substrat doit être préparé fraîchement, surtout si du H2O2 est ajouté avant utilisation.